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ChIP-Seq對(duì)樣品有哪些要求?

更新時(shí)間:2022-03-17   點(diǎn)擊次數(shù):1592次
  染色質(zhì)免疫共沉淀測(cè)序(ChIP-Seq)是指對(duì)染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)獲得的DNA的片段進(jìn)行大規(guī)模測(cè)序,并能把所研究蛋白的DNA結(jié)合位點(diǎn)精確定位到基因組上。
  RocheGSFLXTitanium、IlluminaHiseq2000和ABSOLID4這3種測(cè)序技術(shù)均可以用于ChIP-seq,其中采用IlluminaHiseq2000進(jìn)行ChIP-Seq已有較多文獻(xiàn)報(bào)道。
  ChIP-Seq技術(shù)高質(zhì)量、高通量、低成本的數(shù)據(jù)產(chǎn)出,為表觀遺傳組學(xué)研究奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。研究者可以在以下幾方面展開研究:
  (1)判斷DNA鏈的某一特定位置會(huì)出現(xiàn)何種組蛋白修飾;
  (2)檢測(cè)RNApolymeraseII及其它反式因子在基因組上結(jié)合位點(diǎn)的精確定位;
  (3)研究組蛋白共價(jià)修飾與基因表達(dá)的關(guān)系;
  (4)CTCF轉(zhuǎn)錄因子研究。
  ChIP-Seq有什么樣品要求?
  (1)請(qǐng)?zhí)峁舛?ge;10ng/ul、總量≥20ng、OD260/280為1.8~2.2的DNA樣品;若單次ChIP后DNA量不夠,建議將2~3次ChIP的DNA合并在一起。
  (2)請(qǐng)?zhí)峁〥NA打斷時(shí)檢測(cè)膠圖,要求打斷后DNA電泳主帶在100-500bp范圍內(nèi);請(qǐng)對(duì)于ChIP獲得DNA設(shè)計(jì)引物進(jìn)行QPCR驗(yàn)證和定量,能夠提供檢測(cè)位點(diǎn)的檢測(cè)報(bào)告。附陽(yáng)性和陰性對(duì)照。
  (3)樣品請(qǐng)置于1.5ml管中,管上注明樣品名稱、濃度以及制備時(shí)間,管口使用Parafilm封口。在運(yùn)輸前將所有樣品管固定于50ml帶蓋離心管中,再將50ml管放在封口袋中。為了防止低濃度樣品黏附在離心管壁上,請(qǐng)使用non-sticktube運(yùn)輸DNA;建議使用冰袋運(yùn)輸,并且盡量選用較快的郵遞方式,以降低運(yùn)輸過程中樣品降解的可能性。

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